其他经典技术

胚胎冷冻保存方法有哪些?

  • 本文作者:www.jiaenhospital.com
  • 本文来源:北京家恩德运医院

胚胎冷冻保存是将胚胎长期保存在-196~C超低温液氮中。胚胎移植可以不受时间和地点的限制,从而达到提高胚胎移植效率,长期保存优良基因的目的。今天,我们将介绍现有的胚胎冷冻方法。

现有的胚胎冷冻方法有三种:

①常规冷冻方法:也叫慢速冷冻法、逐步降温法。将采集到的胚胎用培养液洗涤后置入有不同冷冻保护剂(甘油或二甲亚枫(DMSO)等)浓度的三种冷冻液中(冷冻液浓度由低到高,终浓度1.4M),每种冷冻液中平衡5分钟,然后将胚胎和冷冻液装入细管中封口、标记,放入冷冻仪中进行冷冻。冷冻速率先以1~3~C/分下降至-6~-7℃,在此温度诱发结晶,平衡10分钟,然后,以0.3℃/分的速率降温至-35~_38℃,之后投入液氮中保存。胚胎解冻后,需按胚胎进入冷冻液时的相反浓度,即从高到低浓度脱除冷冻保护剂,每步5分钟,后置入含20%血清的PBS保护液中洗涤3次,彻底脱除冷冻保护剂。或者将解冻后的胚胎放入0.5M(或1.0M)的蔗糖溶液中平衡10分钟,再用上述PBS液洗涤3次。

②一步冷冻法:也称为一步细管法。该方法采用慢速冷冻法改进,细管内的冷冻液和蔗糖液是分开的,因此,在细管内用蔗糖液可一步脱除甘油抗冻剂,从而利于在生产中推广应用。

③玻璃冷冻法:是近年来发展起来的一种新的方法。将胚胎在适当的冷冻保护剂混合液中作短暂处理后,直接投入液氮。冷冻保护剂在急剧降温到很低温度时能被浓缩而不结晶,而且液体的粘性增强,由液态变为透明的固态,形成玻璃化。用这种方法冷冻,无需冻前分步添加抗冻剂和冻后分步脱除抗冻剂的繁琐步骤,简化了冷冻过程,是一种简便、快速、有效的冷冻方法,不需要冷冻仪器。

以上是专家的详细介绍。相信大家在此基础上都有一定的了解,希望对大家有所帮助。如果您想了解更多相关信息,如果您仍然不理解或有任何问题,可以在线咨询专家,回答您的问题。


北京家恩德运医院有限公司
京ICP备14000842号-1 京医广审字:(京)医广【2023】第07-31-2045号
网站申明:1.信息仅供参考,不能作为诊疗及医疗依据;2.转载或引用文章涉及版权问题请速与我们联系;3.商标及图片权 属本医院所有。